Swe rekombinante Trypsin-EDTA-Lösung ohne Phenolrot

Trypsin ist eine Serinhydrolase, die den Carboxylterminus von Lysin und Arginin in Polypeptidketten abschneiden kann. Trypsin-Verdauungen werden bei der Extraktion von Gewebezellen, der Kultur und der In-vitro-Zellkultur verwendet, um interzelluläre Proteine ​​zu hydrolysieren und Gewebe oder Zellen in einzelne Zellen zu dissoziieren. Herkömmliches Trypsin wird aus der Bauchspeicheldrüse von Tieren wie Schweinen und Kühen gewonnen. Aufgrund der Herkunft herkömmlicher Pankreasenzyme und der Besonderheiten des Herstellungsprozesses sind zwangsläufig Verunreinigungen tierischen Ursprungs und eine potenzielle Viruskontamination enthalten. Dieses Produkt verwendet rekombinantes Schweine-Trypsin als Ersatz für herkömmliches Trypsin. Im Produktionsprozess werden keine tierischen Rohstoffe verwendet und die Reinheit und Lebensfähigkeit des rekombinanten Schweine-Trypsins wird durch mehrere Reinigungsrunden sichergestellt. Dadurch kann es nicht nur die Funktion von herkömmlichem Trypsin ersetzen, sondern auch für die Verdauung spezieller Zellen oder Gewebe verwendet werden, bei denen eine tierfreie Herkunft unbedingt erforderlich ist. Darüber hinaus enthält das Produkt EDTA, keine Phenolrot-Indikatoren.

Schiff mit nassem Eis; 12 Monate lang bei 4 Grad lichtgeschützt lagern. Wenn das Produkt für kurze Zeit nicht verwendet wird, empfiehlt es sich, es über einen längeren Zeitraum bei -20 Grad zu lagern.

Hinweis: Die folgenden Protokolle werden hauptsächlich für adhärente Zellen verwendet. Für den Gewebeverdau muss das Gewebe zunächst in geeignete Größen geschnitten werden. Die für die Verdauung benötigte Zeit variiert stark von Gewebe zu Gewebe und es ist in der Regel ratsam, dass die Gewebe nach der Verdauung ausreichend aufgeschlossen werden.

1. Entfernen Sie das ursprüngliche Zellkulturmedium und waschen Sie die Zellen 1-2 Mal mit PBS, serumfreiem Medium oder anderen Puffern, um restliches Serum zu entfernen.

2. Fügen Sie die entsprechende Menge an rekombinanter Trypsin-Verdauungslösung hinzu, um die Zellen zu bedecken, und verdauen Sie sie unter dem Mikroskop, um zu beobachten, dass die Verdauungszeit der meisten Zellen zwischen 30 s-3min; Bei unverdaulichen Zellen kann es zur Verdauung für einen bestimmten Zeitraum in den Zellkultur-Inkubator gegeben werden (die Verdauungszeit dient nur als Referenz, die spezifische Verdauungszeit sollte entsprechend der tatsächlichen Situation bestimmt werden).

3. Wenn die Zellen deutlich schrumpfen oder sich morphologisch verändern, saugen Sie den rekonstituierten Trypsinverdau ab und fügen Sie eine entsprechende Menge serumhaltiges Zellkulturmedium hinzu, um den Verdau zu beenden (wenn sich die Zellen durch leichtes Anblasen nur schwer vom Boden der Platte lösen lassen). B. einer Pipette, zeigt dies an, dass die Verdauungszeit nicht ausreicht und die Verdauung durch Zugabe von Trypsin-Zellverdau wieder aufgenommen werden kann. Vermeiden Sie eine Überverdauung.

4. Sammeln Sie die Zellsuspension in einem Zentrifugenröhrchen, zentrifugieren Sie bei 800-1200 U/min/Min. für 3-5 Min. und geben Sie die entsprechende Menge serumhaltiges Zellkulturmedium hinzu (optional).

5. Blasen Sie die Zellen vorsichtig aus, um eine Zellsuspension herzustellen, die für die Passage oder nachfolgende Experimente verwendet werden kann.

1. Dieses Produkt kann direkt zur Zellverdauung bei 4 Grad verwendet werden. Die Aufschlusstemperatur kann je nach Bedarf bei Raumtemperatur oder im Brutschrank gewählt werden, bitte das Produkt jedoch nicht direkt auf 37 Grad vorheizen. Der wiederholte Anstieg und Abfall der Temperatur hat einen gewissen Einfluss auf die Enzymaktivität.

2. Nach Erhalt kann das Produkt portionsweise nach Bedarf gelagert werden; Wenn eine Lagerung bei -20 Grad erforderlich ist, vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.

3. Die Verdauungszeit variiert je nach Zelllinie oder Gewebe. Überprüfen Sie daher bitte die optimale Verdauungszeit, um eine zu lange Verdauung zu vermeiden, die sich auf die Zellaktivität und den Zellzustand auswirken kann.

4. Dieses Produkt ist aseptisch und gebrauchsfertig und wurde auf Mykoplasmen und Endotoxin getestet. Bitte achten Sie bei der Anwendung auf einen aseptischen Betrieb.

5. Im Interesse Ihrer Gesundheit und Sicherheit tragen Sie bei der Arbeit bitte einen Laborkittel und Handschuhe.

Nur für Forschungszwecke!

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