Lipidtröpfchen-Fluoreszenz-Assay-Kit

 

Produktname	Katze. NEIN.	Spez.
Lipidtröpfchen-Fluoreszenz-Assay-Kit	G1905-100T	100 T

 

 

Lipidtröpfchen sind spezialisierte Lipidspeicherorganellen in Zellen, die die Speicherung und Hydrolyse neutraler Lipide in Zellen regulieren und für ein dynamisches Energiegleichgewicht der Zellen sorgen können. Darüber hinaus können sich Lipidtröpfchen entlang des Zytoskeletts bewegen und mit anderen Organellen interagieren, wodurch sie eine wichtige Rolle bei der Regulierung der Signaltransduktion spielen. Eine abnormale Ansammlung zellulärer Lipidtröpfchen kommt bei verschiedenen Arten von Stoffwechselerkrankungen vor, wie etwa Fettleibigkeit, Fettleber, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und pathologischen Zuständen.

Das Lipid-Tröpfchen-Fluoreszenz-Assay-Kit basiert auf BODIPY 493/503, einer lipophilen Fluoreszenzsonde, die polare Lipide lokalisieren kann und zur Kalibrierung des neutralen Lipidgehalts von Zellen und Geweben verwendet werden kann. Dieses Kit wurde von uns optimiert und debuggt Das Forschungs- und Entwicklungsteam verfügt über zahlreiche Vorteile wie einfache Handhabung, stabile Leistung und gute Reproduzierbarkeit usw. Je höher der intrazelluläre Lipidgehalt, desto stärker ist die Intensität der erzeugten Fluoreszenz. die mittels Fluoreszenzmikroskop und Durchflusszytometer nachgewiesen werden können. Darüber hinaus liefert dieses Kit zusätzlich Ölsäure als Induktor der Triglyceridsynthese und -speicherung, die zur Induktion der Positivkontrolle verwendet werden kann.

 

 

Mit Trockeneis versenden; 6 Monate lang bei -20 Grad lichtgeschützt lagern.

 

 

Komponentennummer	Komponente	G1904-100T
G1905-1	Lipid-Tröpfchen-Assay-Sonde (2 mM)	100 μL
G1905-2	Lipid-Tröpfchen-Assay-Puffer	100 ml
G1905-3	Positiver Induktor (500 mM)	50 μL
Handbuch		1 Stk

 

Hinweis: Die oben genannten Reaktionszeiten gelten für ein 6-Well-Plattensystem.

 

 

Hinweis: Nehmen Sie als Beispiel 6-Well-Platten-adhärente Zellen: Suspensionszellen müssen bei jedem Flüssigkeitswechsel zentrifugiert werden; Gewebeproben beziehen sich direkt auf die Färbe- und Markierungsschritte, und die Gesamtmenge der verwendeten Reagenzien wird je nach Situation angepasst; Bei Bedarf können die Proben vorab fixiert werden, bitte vermeiden Sie jedoch eine Perforation der Proben.

1. Vorbereitung der Arbeitslösung für den Lipidtröpfchentest und der Arbeitslösung für die Lipidtröpfcheninduktion:

1.1. Nehmen Sie eine geeignete Menge Lipidtröpfchen-Assay-Sonde (2 mM) und Lipidtröpfchen-Assay-Puffer, mischen Sie gründlich im Verhältnis 1: 500-2000 und bereiten Sie eine Arbeitslösung für den Lipidtröpfchen-Assay vor;

1.2. Nehmen Sie eine geeignete Menge positiven Induktors (500 mM) und verdünnen Sie ihn mit dem Zellkulturmedium der entsprechenden Testzellen auf 400-1000 uM und bereiten Sie eine Arbeitslösung zur Lipidtröpfcheninduktion für den Ersatzgebrauch vor (diese Konzentration ist eine Referenz). Reichweite und kann entsprechend der Art der Zellen oder anderen Umständen entsprechend angepasst werden).

2. Positive Kontrollgruppe sowie medikamentöse und andere Behandlungen (6-Wellplatte anhaftende Zellen, z. B. Suspensionszellen, bitte bei jedem Flüssigkeitswechsel zentrifugieren):

2.1. Die Zellen werden je nach Bedarf in 6-Well-Platten vorgepflanzt (mit oder ohne Crawler, je nach Assay und Ausrüstung);

2.2. Entfernen Sie das ursprüngliche Zellkulturmedium und waschen Sie es zweimal mit PBS oder anderen Puffern;

2.2.1. Versuchsgruppe: Die zu testenden Zellen werden einer medikamentösen Stimulation oder anderen relevanten Behandlungen unterzogen und die gewünschte Inkubationszeit wird von Ihnen selbst festgelegt.

2.2.2. Positive Kontrollgruppe: 1 ml der Arbeitslösung zur Lipidtröpfcheninduktion wird in die Wellplatte gegeben, die zur Inkubation über Nacht in einen Inkubator gestellt wird.

2.3. Fahren Sie am Ende der Inkubation mit Schritt 3 zur Fleckenmarkierung fort.

3. Lipidtropfen-Färbemarker:

3.1. Entfernen Sie das zellogene Medium und waschen Sie es 2-3 Mal mit PBS oder anderen Puffern;

3.2. Entfernen Sie den Waschpuffer, geben Sie 1 ml Lipid Droplet Assay Working Solution hinzu und mischen Sie unter leichtem Schütteln.

3.3. 15 Minuten lang in einem lichtgeschützten CO2-Inkubator inkubieren;

3.4. Waschen Sie es nach der Inkubation zweimal mit PBS oder anderen Puffern, und es kann entsprechend den experimentellen Anforderungen mit Kernen und anderen Vorgängen weiter angefärbt oder mit der entsprechenden Ausrüstung nachgewiesen werden;

4. Erkennung von Lipidtröpfchen:

4.1. Die Probe wird nach der Inkubation und dem Waschen in 3.4 mit der geeigneten Methode und Instrumentierung analysiert und mit grüner Fluoreszenz, EX/EM 493/503 nm, gekennzeichnet. Nachfolgend sind einige Beispiele für den instrumentellen Nachweis aufgeführt.

4.1.1. Direkt oder mit einer Anti-Fluoreszenz-löschenden Versiegelungslösung (Art.-Nr. G1401) wird die Folie versiegelt und dann zur Detektion und Analyse unter ein Fluoreszenzmikroskop gelegt.

4.1.2. Nach dem Aufschluss und der Resuspension mittels tryptischem Verdau (es werden keine Suspensionszellen verwendet) werden die Zellen mithilfe der Durchflusszytometrie nachgewiesen und analysiert.

 

 

1. Aufgrund der unterschiedlichen Arten und Eigenschaften von Zellen können die Konzentration positiver Induktoren und Sonden sowie die Inkubationszeit entsprechend den Anforderungen des Experiments angepasst werden.

2. Proben sollten den Kontakt mit organischen Lösungsmitteln oder anderen Komponenten, die Lipide beeinflussen, vermeiden, um die Genauigkeit des Tests nicht zu beeinträchtigen.

3. Die Fluoreszenzfarbstoffe unterliegen einer Löschung und der Prozess sollte vor Licht geschützt werden.

4. Zu Ihrer Gesundheit und Sicherheit tragen Sie während des Betriebs bitte einen Laborkittel und Handschuhe.

 

Nur für Forschungszwecke!

 

 

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