Mykoplasmen-Nachweiskit (PCR)

Eine Kontamination mit Mykoplasmen hat schädliche Auswirkungen auf alle Aspekte der Zellen und ist zu einem hochgeschätzten Problem in der Zellkultur geworden. Daher ist es sehr wichtig, regelmäßig eine Mykoplasmenkontamination festzustellen. Dieses Mykoplasmen-Nachweiskit verwendet die PCR-Methode, um Mykoplasmenkontaminationen in verschiedenen kultivierten zellbiologischen Materialien (z. B. Zellkulturen, Sekreten von Versuchstieren, Tierserum usw.) gezielt nachzuweisen. Die im Kit verwendeten gemischten Primer sind spezifische Primer, die für die konservierte Region der 16S-rRNA-Sequenz von Mycoplasma entwickelt wurden. Die spezifische PCR-Amplifikation von Mycoplasma-DNA kann mit dem passenden Mycoplasma-PCR-Mix (2×) unter Verwendung von Zellkulturlösung als PCR-Vorlage innerhalb einer Stunde abgeschlossen werden. Dieses Kit verfügt über eine hohe Empfindlichkeit und kann bereits 20 Kopien von Mykoplasmen erkennen.

Schiff mit nassem Eis; Gespeichert bei -20 Grad, gültig für 12 Monate.

1. Bereiten Sie die Probe vor: Die entsprechende Menge des zu testenden Zellkulturüberstands wurde in ein sauberes PCR-Röhrchen gegeben. Diese PCR-Röhrchen wurden 5 Minuten lang bei 95 Grad in einem PCR-Gerät wärmebehandelt und als Vorlage verwendet. Serumproben konnten mit Mykoplasmen-freiem Wasser verdünnt werden und die entsprechenden Proben wurden in ein sauberes PCR-Röhrchen gegeben. Diese PCR-Röhrchen wurden 5 Minuten lang bei 95 Grad in einem PCR-Gerät wärmebehandelt und als Vorlage verwendet. ;

2. Bereiten Sie die PCR-Reaktionen vor: Negativkontrolle (ersetzen Sie 1 μL Probe durch die gleiche Menge an Mycoplasma-freiem Wasser) und Positivkontrolle (fügen Sie 0,5 μL Positivkontrolle zu 1 μL Probe als Vorlage hinzu) werden eingestellt jedes Experiment. Tragen Sie während des Experiments Einwegmasken und Handschuhe und gehen Sie vorsichtig vor, um eine unsachgemäße Einführung einer exogenen Mykoplasmenkontamination zu verhindern.

3. Einrichten des PCR-Programms:

4. Gelelektrophorese: Nehmen Sie 10 μl PCR-Produkt und verwenden Sie 1 % Agarosegel für den Elektrophoresenachweis.

5. Analysieren Sie die Ergebnisse: In jedem Experiment wird die Mykoplasmenkontamination der Proben durch Vergleich mit den Ergebnissen der Negativkontrolle und der Positivkontrolle ermittelt. Die positive Bandengröße betrug etwa 500 bp. Wenn die Testergebnisse der Negativkontrolle Banden aufweisen, liegt wahrscheinlich eine Kontamination im PCR-System vor und es wird empfohlen, die Ergebnisse erneut zu bestätigen. Bei Bedarf können PCR-Produkte auch routinemäßig sequenziert werden, um bestimmte Mykoplasmenarten zu identifizieren.

1. Dieses Kit kann M. orale,M. arginini,M. bovis,M. fermentans,M. gallisepticum,M. hominis,M. pirum, Ureaplasma spp, M. hyorhinis,M. pneumoniae,A. laylawii und andere mindestens 11 Arten von Mykoplasmen-Kontaminationen.

2. Alle Reagenzien sollten vor der Verwendung aufgetaut und gründlich auf Eis gemischt und nach der Verwendung bei -20 Grad gelagert werden.

3. Für jedes Experiment müssen Negativkontrollen und Positivkontrollen eingestellt werden, und die Versuchsgruppe empfiehlt, Probenvorlagengradienten festzulegen.

4. Während der Operation müssen Masken getragen werden und die PCR-Operationsstandards müssen strikt eingehalten werden, um zu verhindern, dass die Einführung exogener Verschmutzung die Versuchsergebnisse beeinträchtigt.

5. Um die Zuverlässigkeit und Stabilität von Zellexperimenten zu gewährleisten, wird empfohlen, die Kontamination mit Mykoplasmen regelmäßig zu erkennen.

6. Zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte einen Laborkittel und Einweghandschuhe.

Nur für Forschungszwecke!

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