Universelles DNA-Reinigungs- und Gelextraktionskit

Das Universal DNA Purification and Gel Extraction Kit verwendet eine einzigartige Bind DNA Mini Column, die zur Gewinnung von DNA-Fragmenten aus TAE- oder TBE-Agarose-Gelen sowie zur direkten Reinigung von PCR-Produkten verwendet werden kann, um eine Vielzahl experimenteller Anforderungen zu erfüllen. Der Puffer GL enthält einen pH-Indikator, der anhand der Lösungsfarbe beurteilen kann, ob die Gellösung oder die PCR-Produktrückgewinnung den optimalen Zustand erreicht hat. DNA-Fragmente von 100 bp-10 kb können mit einer Wiederfindungsrate von 85 % wiederhergestellt werden. Die DNA-Bindungskapazität jeder Säule beträgt bis zu 20 µg. Mit diesem Kit gewonnene DNA eignet sich für eine Vielzahl von Routinevorgängen, einschließlich Enzymverdau, PCR, Sequenzierung, Bibliotheksscreening, Ligation und Transformationsexperimente.

Bei Raumtemperatur versenden und lagern, 12 Monate gültig.

DNA-Extraktion aus Agarosegelen

1. Säulengleichgewicht: Geben Sie die Bind DNA Mini-Säulen in die Sammelröhrchen, geben Sie dann 500 μl Lösungspuffer BL in die Bind DNA Mini-Säulen, zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g und entfernen Sie die Abfallflüssigkeit darin die Sammelröhrchen und geben Sie die Bind DNA Mini-Säulen wieder in die Sammelröhrchen (bitte verwenden Sie Säulen, die am selben Tag verarbeitet wurden).

2. Einzweck-DNA-Banden werden mit einer sauberen Klinge aus dem Agarosegel geschnitten (so viel Überschuss wie möglich entfernen) in saubere Zentrifugenröhrchen gegeben und gewogen.

3. Fügen Sie dem Gelblock ein gleiches Volumen Puffer GL hinzu (wenn das Gel 0,1 g wiegt und sein Volumen als 100 µL angesehen werden kann, dann fügen Sie 100 µL Puffer GL hinzu). und Wasserbad bei 60 Grad, bis der Gelblock vollständig aufgelöst ist (drehen Sie während dieser Zeit das Zentrifugenröhrchen vorsichtig auf und ab, um sicherzustellen, dass der Gelblock ausreichend aufgelöst ist. Wenn das Volumen des Gelblocks zu groß ist, Schneiden Sie den Gelblock vorher in kleine Stücke) (Hinweis: Für eine hohe Rückgewinnungsausbeute kann nach der Zugabe von Puffer GL 1/2 Gelvolumen Isopropanol hinzugefügt werden, um das Gel vollständig aufzulösen und die Rückgewinnungsrate zu erhöhen; am besten ist es, die Lösungstemperatur zu senken Auf Raumtemperatur bringen, nachdem das Gel vollständig aufgelöst ist, bevor die Säule geladen wird, da die Säule bei Raumtemperatur eine stärkere Fähigkeit hat, DNA zu binden. Das Gel sollte nach dem vollständigen Schmelzen hellgelb erscheinen und kann für nachfolgende Operationen verwendet werden ist violett oder rot, nachdem das Gel vollständig ausgehärtet ist geschmolzen ist, verwenden Sie 10 µL 3M Natriumacetat (pH 5,0), um die Farbe der Lösung in ein blasses Gelb zu ändern, bevor Sie fortfahren.

4. Übertragen Sie die gesamte im vorherigen Schritt erhaltene Lösung in die Säule (Adsorptionssäule im Sammelröhrchen), zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g, entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit im Sammelröhrchen und stellen Sie die Säule auf in das Sammelröhrchen (Hinweis: Das Volumen der Säule beträgt 800 μL. Wenn das Probenvolumen mehr als 800 μL beträgt, kann es in Chargen hinzugefügt werden).

5. Geben Sie 700 μl Puffer PW in die Säule (überprüfen Sie vor der Verwendung, ob wasserfreies Ethanol hinzugefügt wurde), zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g, entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit aus dem Sammelröhrchen und stellen Sie die Säule auf in ein Sammelröhrchen (Hinweis: Wenn die gewonnene DNA in salzempfindlichen Experimenten wie Flat-End-Ligationsexperimenten oder direkter Sequenzierung verwendet werden soll, wird empfohlen, Puffer PW stehen zu lassen 2-5 Min. vor der Zentrifugation)

6. Wiederholen Sie Schritt 5.

7. Legen Sie die Säule in ein Sammelröhrchen und zentrifugieren Sie sie 2 Minuten lang bei 10,000 g, um so viel Restflüssigkeit wie möglich zu entfernen. Lassen Sie die Säule 5 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen und trocknen Sie sie gründlich ab (Hinweis: Ethanolrückstände in der Spüllösung beeinträchtigen den nachfolgenden Enzymverdau, die PCR und andere Experimente).

8. Geben Sie die Säule in ein sauberes Zentrifugenröhrchen, lassen Sie sie 5 Minuten lang bei Raumtemperatur und trocknen Sie sie gründlich ab (Hinweis: Der Ethanolrückstand in der Spüllösung beeinträchtigt den nachfolgenden Enzymverdau, die PCR und andere Experimente). Fügen Sie 3 { {21}}~50 μL Elutionspuffer oder ddH2O bis zur Mitte der Membran, die über die Membran hinausragt (es ist besser, den Elutionspuffer oder ddH2O vorzuwärmen). (60-65 Grad), lassen Sie es 2 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen und zentrifugieren Sie es dann 2 Minuten lang bei 10,000 g. Lassen Sie die Membran 2 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen und zentrifugieren Sie sie dann 2 Minuten lang bei 10,000 g, um die DNA-Lösung zu sammeln. (Hinweis: Das Volumen des Eluenten sollte nicht weniger als 30 μL betragen, da ein zu geringes Volumen die Rückgewinnungseffizienz beeinträchtigt. Der pH-Wert des Eluenten hat einen großen Einfluss auf die Elutionseffizienz. Wenn die Sequenzierung später durchgeführt werden soll, sollte ddH2O verwendet werden als Eluent verwendet und sein pH-Wert sollte im Bereich von 7,0-8,5 liegen. Ein pH-Wert unter 7,0 verringert die Elutionseffizienz und das DNA-Produkt sollte bei -20 Grad gelagert werden, um einen DNA-Abbau zu verhindern (Um die DNA-Rückgewinnung zu verbessern, kann die durch Zentrifugation erhaltene Lösung wieder in die Zentrifugensäule eingefüllt, 2 Minuten lang bei Raumtemperatur gehalten und bei 10 °C zentrifugiert werden. 000 g für 2 Minuten und die DNA-Lösung wird im Zentrifugenröhrchen gesammelt.

(10) Gewinnung von DNA-Fragmenten aus PCR-Reaktionslösung oder Verdauungsreaktionslösung

1. Säulengleichgewicht: Geben Sie die Bind DNA Mini-Säulen in die Sammelröhrchen, geben Sie dann 500 μl Lösungspuffer BL in die Bind DNA Mini-Säulen, zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g und entfernen Sie die Abfallflüssigkeit darin die Sammelröhrchen und geben Sie die Bind DNA Mini-Säulen wieder in die Sammelröhrchen (bitte verwenden Sie Säulen, die am selben Tag verarbeitet wurden).

2. Schätzen Sie das Volumen der PCR-Reaktionslösung oder der Verdauungsreaktionslösung ab, geben Sie das Dreifache des Lösungsvolumens des Puffers GL hinzu (fügen Sie nicht weniger als 15 0 μL des Puffers GL hinzu) und mischen Sie gut (kein Entfernen erforderlich). Paraffinöl oder Mineralöl). (Hinweis: Für hohe Rückgewinnungsausbeuten kann nach der Zugabe von Puffer GL Isopropanol zu 3/4 des Volumens der PCR- oder Verdauungslösung hinzugefügt werden, um die Rückgewinnungsrate zu erhöhen; die Lösung sollte nach dem Mischen hellgelb sein, bevor Sie fortfahren. Wenn die Farbe Wenn die Lösung nach dem Mischen violett oder rot ist, verwenden Sie bitte 10 µL 3M Natriumacetat (pH 5,0), um die Farbe der Lösung in hellgelb zu ändern, bevor Sie fortfahren.

3. Übertragen Sie die gesamte im vorherigen Schritt erhaltene Lösung in die Bind DNA Mini Column (Bind DNA Mini Columns im Sammelröhrchen), zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g und entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit im Sammelröhrchen , und geben Sie die Bind DNA Mini-Säule in das Sammelröhrchen (Hinweis: Das Volumen der Bind DNA Mini-Säule beträgt 800 μL. Wenn das Volumen der Probe größer als 800 μL ist, kann sie in Chargen hinzugefügt werden).

4. Geben Sie 700 μl Lösungspuffer PW in die Bind DNA Mini-Säule (überprüfen Sie vor der Verwendung, ob wasserfreies Ethanol hinzugefügt wurde), zentrifugieren Sie 1 Minute lang bei 10,000 g und entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit im Sammelröhrchen. und legen Sie die Bind DNA Mini Column in das Sammelröhrchen (Hinweis: Wenn die gewonnene DNA für salzempfindliche Experimente wie Flat-End-Ligation oder direkte Sequenzierung verwendet werden soll, wird empfohlen, Puffer zu verwenden PW muss nach der Zugabe 2-5 Minuten lang stehen gelassen werden, bevor es zentrifugiert wird.

5. Wiederholen Sie Schritt 4.

6. Legen Sie die Säule in ein Sammelröhrchen und zentrifugieren Sie sie 2 Minuten lang bei 10,000 g, um so viel Restflüssigkeit wie möglich zu entfernen.

7. Geben Sie die Säule in ein sauberes Zentrifugenröhrchen, lassen Sie sie 5 Minuten lang bei Raumtemperatur und trocknen Sie sie gründlich ab (Hinweis: Der Ethanolrückstand in der Spüllösung beeinträchtigt den nachfolgenden Enzymverdau, die PCR und andere Experimente). Fügen Sie 3 { {21}}~50 μL Elutionspuffer oder ddH2O bis zur Mitte der Membran, die über die Membran hinausragt (es ist besser, den Elutionspuffer oder ddH2O vorzuwärmen). (60-65 Grad), lassen Sie es 2 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen und zentrifugieren Sie es dann 2 Minuten lang bei 10,000 g. Lassen Sie die Membran 2 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen und zentrifugieren Sie sie dann 2 Minuten lang bei 10,000 g, um die DNA-Lösung zu sammeln. (Hinweis: Das Volumen des Eluenten sollte nicht weniger als 30 μL betragen, da ein zu geringes Volumen die Rückgewinnungseffizienz beeinträchtigt. Der pH-Wert des Eluenten hat einen großen Einfluss auf die Elutionseffizienz. Wenn die Sequenzierung später durchgeführt werden soll, sollte ddH2O verwendet werden als Eluent verwendet und sein pH-Wert sollte im Bereich von 7,0-8,5 liegen. Ein pH-Wert unter 7,0 verringert die Elutionseffizienz und die DNA-Produkte sollten sein bei -20 Grad gelagert, um einen DNA-Abbau zu verhindern (Um die Menge der gewonnenen DNA zu erhöhen, kann die durch Zentrifugation erhaltene Lösung wieder in die Zentrifugensäule eingefüllt, 2 Minuten lang bei Raumtemperatur belassen und bei 10 °C zentrifugiert werden. 25}} g für 2 Minuten und die DNA-Lösung wird in einem Zentrifugenröhrchen gesammelt.

1. Die Zugabe von Puffer BL verbessert die Adsorptionskapazität der Adsorptionssäule und erhöht die Homogenität und Stabilität der Säule, wodurch die Auswirkungen hoher Temperaturen/Feuchtigkeit oder anderer unerwünschter Umgebungsfaktoren auf die Säule eliminiert werden, und der Säulenäquilibrierungsschritt kann ebenfalls durchgeführt werden weggelassen.

2. Bitte prüfen Sie vor der Verwendung, ob dem Puffer PW die angegebene Menge an wasserfreiem Ethanol zugesetzt wurde.

1. Bitte ziehen Sie die Kappe sofort nach jeder Verwendung der Lösung fest.

Nur für Forschungszwecke!

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