Gram-Färbekits

Die Gram-Färbung ist eine in der Mikrobiologie weit verbreitete Differentialfärbemethode, mit der grampositive Bakterien (G+) von gramnegativen Bakterien (G-) unterschieden werden können. Das Grundprinzip basiert auf den unterschiedlichen chemischen Bestandteilen bakterieller Zellwände. Nach der Primärfärbung mit Kristallviolett und der Beizung mit Jod bilden Bakterien wasserunlösliche Kristallviolett-Jod-Komplexe in der Zellwand. Grampositive Bakterien haben dicke Zellwände, enthalten keine Lipide, sind reich an Peptidoglycan und sind zu einer dichten Gitterstruktur vernetzt. Bei Behandlung mit Ethanol schrumpft das Peptidoglycan-Netz, was den Kristallviolett-Jod-Komplex blockieren kann. Es verbleibt in der Zellwand und verleiht ihr die violette Farbe von Kristallviolett. Gramnegative Bakterien hingegen haben dünne Zellwände, einen geringen Peptidoglykangehalt und eine lockere Vernetzung. Bei Einwirkung von Ethanol löst sich die lipidreiche Außenmembran auf, es entsteht ein großer Spalt in der Zellwand und der Kristallviolett-Jod-Komplex fließt aus, sodass die Zellen nach der Entfärbung durch Ethanol farblos werden. Zu diesem Zeitpunkt werden gramnegative Bakterien durch die Safranin-Gegenfärbung rot gefärbt.

Die Gram-Färbelösung enthält vier Komponenten, nämlich Ammoniumoxalat-Kristallviolett-Färbelösung, 1 % Jodlösung, Entfärbelösung und Fuchsin-Färbelösung. Nach der Färbung erscheinen grampositive Bakterien violett bis blauviolett und gramnegative Bakterien erscheinen rot.

Lagerung und Transport bei Raumtemperatur; 12 Monate gültig.

1. Den Paraffinabschnitt zu Wasser entparaffinieren; Trocknen Sie den Bakterienabstrich auf natürliche Weise oder erwärmen Sie ihn mit einer Alkohollampe, um ihn zu trocknen und zu fixieren.

2. Erstes Färben: Geben Sie tropfenweise Kristallviolett-Färbelösung hinzu, um die Probe 10-30 s lang zu bedecken, waschen Sie sie mit Wasser und schleudern Sie sie trocken.

3. Beizfärben: 1 % Jodlösung tropfenweise hinzufügen, um die Probe 1-1,5 Minuten lang zu bedecken, mit Wasser waschen und trocken schleudern.

4. Entfärbung: Geben Sie tropfenweise Entfärbungslösung hinzu, um das Gewebe von einem Ende des Objektträgers zur Entfärbung abzuspülen, bis die herabfließende Entfärbungslösung nicht mehr violett erscheint, und waschen Sie sie sofort mit Wasser, um die Entfärbungslösung zu entfernen. Achten Sie darauf, die Entfärbezeit zu kontrollieren.

5. Gegenfärbung: Fuchsin-Färbelösung tropfenweise für 20-60 s zugeben, dann mit Wasser waschen. Tupfen Sie die Ränder mit Filterpapier ab.

6. Bakterienabstriche können direkt mikroskopisch beobachtet werden. Nach dem Trocknen bei 60 Grad wurden die Gewebeschnitte dreimal schnell in absolutem Ethanol dehydriert, jeweils 1 s, 3 s und 5 s. Anschließend wurde es 5 Minuten lang mit Xylol transparent gemacht und schließlich zur mikroskopischen Untersuchung mit neutralem Gummi versiegelt.

1. Ziehen Sie die Kappe rechtzeitig nach der Verwendung des Reagenzes fest, um zu verhindern, dass sich das Lösungsmittel verflüchtigt.

2. Der Bakterienausstrich ist zu dick, die Kristallviolett-Färbezeit ist zu lang und die Entfärbung ist unzureichend, was zu falsch positiven Ergebnissen führen kann. Es wird empfohlen, sowohl negative als auch positive Bakterienkontrollgruppen durchzuführen.

3. Mit jedem Satz Färbelösung können etwa 30 Schnitte gefärbt werden (Tropfenfärbung).

4. Bitte tragen Sie während des Betriebs einen Laborkittel und Einweghandschuhe.

Nur für Forschungszwecke!

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