Rekombinante SUMO-Protease (Ulp1, His-Tag)

 

Produktname	Katze. NEIN.	Spez.
Rekombinante SUMO-Protease (Ulp1, His-Tag)	G3411-2000U	2000 U

 

 

Rekombinante SUMO-Protease ist eine hochaktive Cysteinylprotease, auch bekannt als Ulp1 (Ubiquitin-ähnliche Protein-spezifische Protease 1). SUMO-Protease spaltet auf hochspezifische Weise und erkennt dabei die Tertiärstruktur des Ubiquitin-ähnlichen (UBL) Proteins, also SUMO eine Aminosäuresequenz. Die optimale Temperatur für die Spaltung beträgt 30 Grad; Das Enzym ist jedoch über einen weiten Temperaturbereich (2-30 Grad) und pH-Wert (pH 6.{{10}}–10.0) aktiv. Im eigentlichen Betrieb wird zur Erhaltung der Struktur und biologischen Aktivität des Zielproteins empfohlen, rekombinante SUMO-Protease über Nacht bei 4 Grad zu verwenden. Gleichzeitig kann die Zugabe einer geeigneten Konzentration von DTT (0,5-2 mM) zum Verdauungssystem auch die Verdauungseffizienz erheblich verbessern.SUMO-Protease, eine hochaktive Cysteinylprotease, auch bekannt als Ulp, ist ein rekombinantes Fragment von Ulp1 (Ubl-spezifische Protease 1) aus Saccharomyces cerevisiae. SUMO-Protease spaltet auf hochspezifische Weise und erkennt die Tertiärstruktur des Ubiquitin-ähnlichen (UBL) Proteins SUMO und nicht eine Aminosäuresequenz. Die Protease kann zur Abspaltung von SUMO aus rekombinanten Fusionsproteinen verwendet werden. Die optimale Temperatur für die Spaltung beträgt 30 Grad; Das Enzym ist jedoch über weite Temperaturbereiche (2-30 Grad) und pH-Werte (pH 6,0–10,0) aktiv. Nach der Verdauung kann die SUMO-Protease durch Affinitätschromatographie unter Verwendung des Polyhistidin-Tags am N-Terminus der Protease leicht aus der Spaltungsreaktion entfernt werden.

 

 

Die Protease kann zur Abspaltung von SUMO aus rekombinanten Fusionsproteinen verwendet werden.

Quelle: Saccharomyces cerevisiae Cysteinprotease. Es wird aus E. coli durch Affinitätschromatographie unter Verwendung des Polyhistidin-Tags gereinigt.

Enzymaktivität: Eine Einheit SUMO-Protease spaltet mehr als oder gleich 85 % von 2 µg Kontrollsubstrat in 1 Stunde bei 3{5}} Grad und pH 8,0.

Inaktivierung oder Hemmung: Konzentrationen des Imidazols über 150 mM können die Aktivität der Protease negativ beeinflussen.

Reinheit und Konzentration: Reinheit größer oder gleich 95 % gemäß SDS-PAGE, 10 U/μL.

Aufbewahrungslösung für rekombinante SUMO-Protease: 25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0,1 % NP-40, 250 mM NaCl, 500 μM DTT, 50 % (Vol./Vol.). ) Glycerin.

10×SUMO-Puffer + Salz: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0,2 % NP-40, 1,5 M NaCl, 10 mM DTT.

10×SUMO-Puffer – Salz: 500 mM Tris-HCl, pH 8,0,2 % NP-40, 10 mM DTT.

 

 

Schiff mit nassem Eis; Bei -20 Grad lagern; Gültig für 12 Monate.

 

 

Komponentennummer	Komponente	G3411-2000U
G3411-1	Rekombinante SUMO-Protease (His-Tag) (10 U/μL)	200 μL
G3411-2	10×SUMO-Puffer + Salz	1 ml
G3411-3	10×SUMO-Puffer – Salz	1 ml
G3411-4	Kontrollprotein	100 μL
Handbuch

 

 

1. Empfohlenes Protease-Verdauungssystem:

Komponente	Volumen
10×SUMO-Puffer +/- Salz	5 μL
Zielproteine	20 µg
Rekombinante SUMO-Protease (His-Tag) (10 U/μL)	1 μL
ddH2O	Auf 50 μL

 

Hinweis: Für die meisten Fusionsproteine ​​funktioniert die SUMO-Protease optimal in einer Reaktionsmischung, die 15 0 mM NaCl enthält; Die Bedingungen können jedoch optimiert werden, indem die NaCl-Konzentration von 0 mM bis 300 mM variiert wird.

2. 1, 2 oder 4 Stunden bei 30 Grad stehen lassen. Es kann auch über Nacht (ca. 16 Stunden) bei 4 Grad verdaut werden, wenn das Zielprotein bei 30 Grad nicht stabil ist.;

3. Entfernen Sie 10 μl Enzymverdauungsprodukt für die SDS-PAGE-Elektrophorese, um die Menge des Enzymverdauungsprodukts und die Reaktionsbedingungen zu bewerten.

 

 

1. Bei Gebrauch in eine Eisbox oder ein Eisbad stellen und unmittelbar nach Gebrauch separat bei -20 Grad lagern.

2. Zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte eine Schutzbrille, Handschuhe oder Schutzkleidung.

Beispiele für Anwendungen des Enzymaufschlusses

Abbildung 1: Wirkung der rekombinanten SUMO-Protease-Verdauung des Kontrollsubstratproteins (SUMO+B-Fusionsprotein) (Die Enzymverdauungsbedingungen sind 30 Grad und pH 8,0, jeweils für 0 Min. bzw. 10 Min , 20 min, 30 min, 1 h, 2 h und 4 h, entsprechend Lane 1-7 wiederum und dem Massenverhältnis von Substrat und Enzymaddin im Enzymverdauungssystem 10:1)

 

Nur für Forschungszwecke!

 

 

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