Produkteinführung
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Produktname |
Katze. NEIN. |
Spez. |
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Alkalische Phosphatase (wärmeempfindlich) |
G3400-1000U |
1000 U |
Produkteinführung
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Produktbeschreibung: |
Servicebio® Alkalische Phosphatase (thermosensitiv) katalysiert die Freisetzung von 5'- und 3'-Phosphatgruppen aus DNA, RNA, dNTP und rNTP. Dieses Enzym entfernt auch Phosphatgruppen aus Proteinen. |
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Anwendungen: |
l Dephosphorylierung der Klonierungsvektor-DNA, um eine Rezirkularisierung während der Ligation zu verhindern. l Reinigung des PCR-Produkts: Nukleotidabbau vor der Sequenzierung des PCR-Produkts. l Dephosphorylierung der 5'-Termini der Nukleinsäure vor der Markierung mit T4-Polynukleotidkinase. |
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Quelle: |
E. coli mit einem geklonten bakteriellen AP-Gen bilden AntarcticBacteriumTAB5. |
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Reinheit: |
Größer oder gleich 95 % nach SDS-PAGE |
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Molekulargewicht |
~35 kDa |
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Konzentration: |
5 U/μL |
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Definition der Aktivitätseinheit: |
Eine Einheit ist die Enzymmenge, die erforderlich ist, um die Dephosphorylierung von 1 µg linearisierter pUC19-DNA am 5'-Ende in 10 Minuten bei 37 Grad zu katalysieren. Dephosphorylierung ist definiert als eine mehr als 95-prozentige Hemmung der Religation linearisierter Plasmid-DNA (bestimmt durch E. coli-Transformation). |
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10× ALP-Reaktionspuffer: |
500 mM Bis-Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM ZnCl2, pH 6,0. |
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Lagerungs-(Verdünnungs-)Puffer: |
10 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl2, 0,01 mM ZnCl2, 50 % Glycerin, pH 7,4. |
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Inaktivierung oder Hemmung |
l Inhibitoren: Metallchelatoren. · l Inaktiviert durch 2-minütiges Erhitzen auf 80 Grad. |
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Lagerbedingungen: |
Bei –20 Grad bis zu 12 Monate lagern. |
Produktinhalte
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Komponentennummer |
Komponente |
G3400-1000U |
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G3400-1 |
Alkalische Phosphatase (wärmeempfindlich) |
200 μL |
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G3400-2 |
10×ALP-Reaktionspuffer |
1 ml |
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Handbuch |
Ein Exemplar |
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Testprotokoll/-verfahren
Dieses Protokoll eignet sich zur Entfernung von 3'- und 5'-Phosphatgruppen aus DNA und RNA.
- Gefrorene Reagenzien auftauen, mischen und kurz zentrifugieren.
- Enzyme auf Eis aufbewahren.
- Bewahren Sie den 10×ALP-Reaktionspuffer bei Raumtemperatur auf.
1. Bereiten Sie die folgende Reaktionsmischung vor, die Folgendes enthält:
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Komponente |
Volumen |
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DNA- oder RNA-Probe |
{} ug |
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10×ALP-Reaktionspuffer |
2 μL |
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Alkalische Phosphatase (wärmeempfindlich) |
1 μL |
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Nukleasefreies Wasser |
Bis 20 μL |
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Gesamtvolumen |
20 μL |
2. Gründlich mischen, kurz schleudern und bei 37 Grad für 15-30 Minuten inkubieren. Die optimale Inkubationszeit und die Enzymkonzentration müssen für jedes Substrat experimentell ermittelt werden.
3. Stoppen Sie die Reaktion, indem Sie es 2 Minuten lang auf 80 Grad erhitzen.
4. Je nach Bedarf nachfolgender Experimente kann die oben genannte dephosphorylierte DNA oder RNA auf verschiedene Arten gereinigt werden (z. B. DNA-Reinigungskit, Phenol-Chloroform-Extraktion und Ethanol-Fällungsmethode).
Notiz
1. Alkalische Phosphatase ist wie die meisten alkalischen Phosphatasen ein Zn2+- und Mg2+-abhängiges Enzym. Der ALP-Reaktionspuffer stellt ausreichend Zn2+ und Mg2+ bereit, um die Enzymaktivität zu gewährleisten.
1. Alkalische Phosphatase wird durch Metallchelatoren (z. B. EDTA), anorganisches Phosphat und Phosphatanaloga gehemmt.
1. Die Aktivität der alkalischen Phosphatase wird in Gegenwart von Reduktionsmitteln (DTT, -ME) verringert.
2. Die alkalische Phosphatase sollte bei der Handhabung auf Eis transportiert und unmittelbar nach der Verwendung bei -20 Grad gelagert werden.
1. Zu Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte eine Schutzbrille, Handschuhe oder Schutzkleidung.
Nur für Forschungszwecke!
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